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Un método simple, rápido y robusto hace que los órganos completos del ratón sean transparentes para la obtención de imágenes

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EZ Clear es un proceso de limpieza de tejido simple, rápido y eficiente. (A) Los tres pasos, que requieren 48 h del protocolo de limpieza de tejido EZ Clear. (B) Imágenes representativas de campo claro de cerebros de ratones adultos (9 semanas de edad) fijados solo en paraformaldehído (PFA) al 4 %, o fijados y aclarados con EZ Clear, Fast 3D, 3DISCO o X-CLARITY. (C) Comparación cuantitativa de los cambios de volumen de los cerebros de ratón antes y después del procesamiento con diferentes protocolos de limpieza. (n=4, ANOVA unidireccional. Las barras de error representan la desviación estándar (DE). ns: no significativo, ****peLife (2022). DOI: 10,7554/eLife.77419

El adagio «Ver para creer» estuvo presente en la mente del Dr. Chih-Wei Logan Hsu y el Dr. Joshua D. Wythe del Baylor College of Medicine cuando ellos y sus colegas desarrollaron una tecnología innovadora llamada EZ Clear. Este nuevo método de limpieza de tejido ha simplificado y acelerado el proceso para hacer que el tejido sea ópticamente transparente, lo que permite la obtención de imágenes en 3D de tejidos completos e intactos o incluso de órganos completos.

Su nuevo método, publicado en la revista eLife, fue desarrollado en el Núcleo de Imagen Óptica y Microscopía Vital (OiVM) en Baylor. La limpieza de tejidos y las imágenes de órganos completos han revolucionado la biología, permitiendo la exploración de órganos en un espacio tridimensional sin comprometer la arquitectura del tejido.

«Los métodos anteriores eran complicados, laboriosos y, a menudo, requerían equipos costosos, así como el uso de solventes orgánicos peligrosos, todo lo cual impedía la adopción generalizada de estos métodos», dijo Hsu, codirector de OiVM y profesor asistente de fisiología integrativa y educación, innovación y tecnología en Baylor. «Estas dificultades nos motivaron a desarrollar un proceso de compensación más simple que los usuarios pudieran completar más fácilmente, ahorrando tiempo y recursos valiosos para enfocarse en las preguntas reales que desean investigar en sus sistemas».

«La belleza de este método es que se puede analizar la muestra desde una vista global o macro sin perturbar físicamente la organización natural del tejido u órgano», dijo Wythe, profesor asociado de fisiología integrativa y neurocirugía en Baylor. También es miembro del Centro Oncológico Integral Dan L Duncan y del Instituto de Investigación Cardiovascular.






Un ojo de ratón con vasos marcados con lectina-649 limpiados con EZ Clear y con una imagen completa en Zeiss Lightsheet Z.1. Crédito: Facultad de Medicina de Baylor

«Por ejemplo, los investigadores ahora pueden visualizar las conexiones neuronales entre el ojo y el cerebro. Si se realiza en secciones, el proceso alteraría la organización natural de los tejidos y es increíblemente difícil de reconstruir en 3D, lo que limita nuestra comprensión de las conexiones entre las neuronas y otras células circundantes en volúmenes o áreas más grandes. Las imágenes en 3D eluden estas limitaciones, y la llegada de EZ Clear hace que las imágenes en 3D sean accesibles para la mayoría de los laboratorios de biología molecular modernos», dijo Wythe.

EZ Clear también conserva los métodos de etiquetado endógenos y sintéticos, como la fluorescencia, sin alterar el tamaño de la muestra. El estudio muestra la limpieza y el etiquetado exitosos de las neuronas y los vasos sanguíneos dentro del cerebro, así como los vasos dentro del ojo, el corazón, los riñones, los testículos y los ovarios, y la limpieza exitosa de los órganos completos del pulmón, el hígado y el bazo del ratón.

«EZ Clear elimina las barreras técnicas anteriores, lo que permite a los investigadores inspeccionar sus órganos de interés desde un nivel macro, de órganos completos, hasta una resolución celular», dijo Wythe. «Ha eliminado los desafíos prácticos, de seguridad y económicos anteriores, al tiempo que proporciona una visualización de órganos completos reproducible y de alta calidad, que es una perspectiva importante, ya que puede proporcionar nuevos conocimientos sobre el tema que se está investigando».

EZ Clear es más rápido, menos costoso y más simple que los métodos de compensación anteriores. «Los investigadores ahora pueden aprender este proceso de limpieza de tejidos reproducible y más fácil de completar en el OiVM. Luego pueden implementarlo en sus propios laboratorios y obtener resultados en 48 horas siguiendo tres pasos simples, mientras que otros métodos necesitan semanas o incluso meses para limpiar el tejido», dijo Hsu. «Luego, pueden llevar el órgano limpio al OiVM para obtener imágenes y análisis en 3D».


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Más información:
Chih-Wei Hsu et al, EZ Clear para una limpieza simple, rápida y robusta de órganos completos en ratones, eLife (2022). DOI: 10.7554/eLife.77419

Información del diario:
eLife


Proporcionado por la Facultad de Medicina de Baylor


Citación: El método simple, rápido y robusto hace que los órganos completos del ratón sean transparentes para la obtención de imágenes (13 de octubre de 2022) recuperado el 13 de octubre de 2022 de https://phys.org/news/2022-10-simple-rapid-robust-method-mouse.html

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Fuente

Escrito por jucebo

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