El efecto de diferentes métodos de extracción de ADN en la cuantificación de cccDNA por qPCR y SB en tejido de hígado de ratón USG infectado con VHB. (A) Presentación esquemática del diseño experimental utilizado para la validación cruzada. (B) Análisis de SB en extractos de ADN no digeridos utilizando sondas de ADN de VHB en tres de los laboratorios. (C) mediciones de qPCR del ADN del VHB total y cccDNA en los extractos de ADN. Las barras representan la mediana y el rango en los cuatro laboratorios. (D) Las mediciones de qPCR de cccDNA se muestran por separado para cada laboratorio, en relación con la cantidad en las extracciones de ADN +PK. Las barras representan la media de mediciones duplicadas. +PK, extracción de ADN total con digestión con proteinasa K; −PK, extracción de ADN total sin digestión con proteinasa K; cccDNA, ADN circular covalentemente cerrado; VHB, virus de la hepatitis B; Hirt, extracción de ADN Hirt, que no incluye una digestión con proteinasa K; qPCR, PCR cuantitativa; SB, mancha de Southern. Crédito: Intestino (2023). DOI: 10.1136/gutjnl-2022-328380
Aproximadamente 300 millones de personas están crónicamente infectadas con el virus de la hepatitis B (VHB), que puede causar cirrosis hepática o cáncer. En consecuencia, existe una necesidad urgente de desarrollar terapias curativas contra el VHB. Sin embargo, debido a la estrategia de replicación única del VHB, la cuantificación del ADN viral en las células hepáticas infectadas, que es esencial en los estudios preclínicos y clínicos, es técnicamente difícil y no está estandarizada.
Un consorcio de investigación internacional dirigido por científicos de DZIF ha desarrollado recomendaciones para la optimización, control y validación de mediciones cuantitativas de ADN viral, que podrían ser cruciales para la evaluación preclínica y clínica de estrategias terapéuticas.
El VHB es un virus de ADN que infecta específicamente los hepatocitos humanos. Después de la infección, las enzimas celulares convierten el genoma de ADN del virus en ADN circular cerrado covalentemente (cccDNA), que forma minicromosomas estables dentro de los núcleos celulares por asociación con proteínas cromosómicas celulares. De esta forma, el ADN viral sirve como molde para la formación de nuevas partículas virales.
Una limitación importante de la investigación preclínica y clínica del VHB es la falta de métodos estandarizados basados en PCR para la cuantificación específica del ADN viral presente como cccDNA en muestras infectadas por el VHB.
Como parte de un consorcio internacional respaldado por la Coalición Internacional para Eliminar el VHB (ICE-HBV), los científicos de DZIF en el Centro Médico Universitario Hamburg-Eppendorf, la Universidad de Heidelberg y la Universidad Técnica de Munich trabajaron junto con la francesa L’Agence nationale de recherches. sur le sida et les hépatites virales (ANRS) y colegas de Gilead Sciences en los EE. UU. para comparar protocolos y desarrollar una guía de mejores prácticas basada en evidencia para cuantificar cccDNA mediante PCR cuantitativa.
«Al comparar diferentes protocolos para cuantificar el ADN del VHB en muestras de tejido, encontramos que la coexistencia de diferentes formas de ADN viral, así como las condiciones de conservación y tratamiento de la muestra, afectan fuertemente la cuantificación basada en PCR del cccDNA del VHB», dice el joven investigador de DZIF, el Dr. Lena Allweiss, quien lideró la colaboración de los seis laboratorios participantes. Sobre la base de los resultados del estudio, el equipo desarrolló recomendaciones metodológicas adaptadas al tipo de muestra para la optimización, el control y la validación de la medición cuantitativa del cccDNA del VHB.
«El estudio ayudará a los programas de investigación de cura del VHB que tienen como objetivo evaluar el impacto de las terapias en el reservorio celular del VHB en estudios preclínicos y ensayos clínicos», dice la profesora principal del estudio, Maura Dandri, científica de DZIF en el Centro Médico Universitario de Hamburgo-Eppendorf.
Más información:
Lena Allweiss et al, Cuantificación del cccDNA del virus de la hepatitis B: pautas basadas en la evidencia para monitorear el obstáculo clave de la cura del VHB, Intestino (2023). DOI: 10.1136/gutjnl-2022-328380
Proporcionado por Deutsches Zentrum für Infektionsforschung
Citación: Nuevos estándares para cuantificar los reservorios del virus de la hepatitis B en células hepáticas (6 de febrero de 2023) consultado el 6 de febrero de 2023 en https://medicalxpress.com/news/2023-02-standards-quantify-hepatitis-virus-reservoirs.html
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